关于PCR扩增体系优化的实验研究

目的　探讨PCR扩增体系中各种成分因子的优化组合 ,以期为真核生物的分子生物学研究提供可靠方法。方法　通过对参与PCR基因扩增体系的成分在一定范围内设置不同的浓度或参数组 ,进行单因子或复因子检测 ,观测各因子在不同条件下对扩增结果的影响。结果　不同模板含量、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTP浓度、Mg2 + 浓度和退火温度对反应结果有不同程度的影响。本研究建立的PCR基因扩增反应体系是反应总体积 2 5 μl,其中 10×扩增缓冲液 2 5 μl、2mMMg2 + 2 μl、2 0 0 μM的dNTPs2 μl、0 2 μM引物 0 5 μl、3u/μl的TaqDNA聚合酶 0 4 2 μl和 2 5ng的模板DNA ,退火温度 39℃。扩增程序为 94℃预变性 30 0秒 ,然后 94℃ 6 0秒 ,39℃ 6 0秒 ,72℃ 12 0秒 ,共 4 5个循环后 72℃延伸 30 0秒。结论　通过对PCR扩增体系中各种成分因子的优化 ,本研究建立的PCR基因扩增体系特异性高且稳定可靠。