重组α-乙酰乳酸脱羧酶的表达及部分酶学特性

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法以短芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｂｒｅｖｉｓ）基因组ＤＮＡ为模板，克隆出０．９７ｋｂ的ＤＮＡ片段，经ＤＮＡ测序证明是α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ＡＬＤＣ）基因。将该基因重组到质粒ｐＢＶ２２０中，构建了重组表达质粒ｐＢＶＹＩ，转化大肠杆菌ＤＨ５α后，经筛选得到能表达α－ＡＬＤＣ活性的转化子细胞。酶活检测表明重组的α－ＡＬＤＣ的活性是供体菌的１００００倍。从转化子细胞的抽提液中纯化了重组α－ＡＬＤＣ后，研究了其部分酶学特性。α－ＡＬＤＣ活性可被Ｍｎ２＋、Ｓｎ２＋增强，被Ｚｎ２＋、Ｃｄ２＋、Ｆｅ２＋、Ｃｏ２＋、Ｃｕ２＋抑制。氨基酸修饰剂对α－ＡＬＤＣ活性有不同程度的抑制作用。其最适ｐＨ值为５．５。