埃他卡林对K通道亚型选择性作用的研究

目的建立特异性表达以K ir6.x和SUR亚单位组成的不同KATP通道亚型的细胞模型,研究KATP通道开放剂埃他卡林对KATP通道亚型的选择性作用特点。方法利用脂质体转染的方法将编码KATP通道亚单位K ir6.x-pcDNA3、SUR-pcDNA3基因和编码绿色荧光蛋白pEGFP-N1基因共同转染到HEK-293细胞中,免疫组化法鉴定细胞上K ir6.x和SUR蛋白的表达,并采用膜片钳全细胞记录技术,以KATP通道特异性激动剂吡那地尔和二氮嗪为对照,分析埃他卡林对特定刺激条件下对K ir6.x和SUR共同转染的细胞上诱发的钾电流的影响,并观察KATP通道特异性拮抗剂格列苯脲的阻断作用。结果在共同转入KATP通道两亚单位基因的HEK-293细胞上,有K ir6.x和SUR蛋白的表达。在共同表达K ir6.1/SUR2B的细胞上,埃他卡林(100μmol.L-1)、吡那地尔(100μmol.L-1)及二氮嗪(200μmol.L-1)均具有增强诱发电流的效应,给药前后-100 mV时电流值由(-88.0±30.8)pA分别增至(-2042.6±127.3)pA,(-1431.9±142.4)pA及(-1104.7±228.9)pA,三者的作用均能被格列苯脲所阻断。相同条件下,在共同表达K ir6.2/SUR2A的细胞上,埃他卡林和吡那地尔能增强诱发电流,此作用对格列苯脲敏感;而二氮嗪对该电流无影响。相反,在共同表达K ir6.2/SUR1的细胞上,二氮嗪能增强诱发电流,此作用对格列苯脲敏感;而埃他卡林和吡那地尔对该电流无影响。结论不同结构钾通道开放剂对不同亚型KATP通道作用不同,埃他卡林与吡那地尔作用相似,能选择性作用于K ir6.1/SUR2B和K ir6.2/SUR2A型KATP通道,对K ir6.2/SUR1型无影响。