血清载脂蛋白A5 ELISA法的建立及评价

目的建立定量测定人血清中载脂蛋白A5(apoA5)浓度的ELISA双抗体夹心法,评价该法的敏感性、特异性、批内批间变异系数(CV),并分析apoA5与血脂指标的相关性。方法方阵法确定apoA5单克隆抗体的最佳检测浓度,建立apoA5标准曲线,ELISA双抗体夹心法测定重组apoA5蛋白,确定最低检测限及批内、批间CV,并检测300例正常人apoA5浓度和血脂指标,应用百分位数法计算apoA5的参考值。结果制备的apoA5单克隆抗体的最佳检测浓度为1∶800,最低检测限为2.12μg/L;特异性检测试验表明:apoA5单克隆抗体只针对重组apoA5蛋白和血清中天然的apoA5,apoA1和BSA的A值均<0.2;批内CV<3.5%,批间CV<5.5%。血清apoA5的参考值范围为255.92～383.81μg/L。相关性分析表明:apoA5与TG呈负相关(r=-0.27,P<0.05),与TC存在负相关趋势,与HDL-C呈正相关(r=0.36,P<0.05)。结论本实验室建立的ELISA双抗体夹心法灵敏度和特异性均较好,为apoA5的临床检测提供了可行的方法。