流式细胞分选术和Rho123在分离MHCC97肿瘤干细胞中的应用

被引：6

作者：

曹云新 ^{[1
]}

千年松 ^{[2
]}

杨安钢 ^{[1
]}

胡金涛 ^{[1
]}

机构：

[1] 解放军第四军医大学免疫学教研室

[2] 解放军第四军医大学肝胆外科

来源：

中国组织工程研究与临床康复 | 2007年 / 46期

关键词：

流式细胞分选术; 罗丹明123; 肿瘤干细胞; CK-19;

D O I：

暂无

中图分类号：

R735.7 [肝肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的:肝癌组织中可能存在具有表型和功能特殊的肝癌细胞,分离和鉴定这群细胞是否具有干细胞特征对阐明肝癌发病机制、揭示肝癌复发和转移具有重要的意义。寻求分离MHCC97肿瘤干细胞的有效方法,探讨角蛋白(CK-19)在不同肝癌细胞亚群中的表达差异。方法:实验于2006-11/2007-05在解放军第四军医大学免疫实验室和肝胆外科实验室完成。细胞来源:MHCC97肝癌细胞(人高转移肝癌细胞系)由上海复旦大学中山医院肝癌研究所提供。实验方法:MHCC97细胞常规消化,HBSS洗涤,制备成单细胞悬液,细胞密度为1×109L-1。每份取1×106个细胞,参考Rho123对线粒体膜电位测定的0.1mg/L质量浓度,分别做0.1mg/L和0.05mg/L两个质量浓度细胞梯度染色,对照组加入维拉帕米(终浓度50mmol/L),以未加Rho123作为阴性对照。实验评估:采用免疫细胞化学方法观察细胞角蛋白19在0.05mg/LRho123细胞及0.1mg/LRho123两组中的表达和含量。结果:单纯加入Rho123组有一低荧光拖尾,而维拉帕米拮抗组无此区域,即0.05mg/LRho123细胞占总数的2.1%,其余为0.1mg/LRho123组细胞。两组细胞内均有细胞角蛋白19阳性表达,阳性反应为显示位于细胞质的棕黄色颗粒,两组比较有统计学差异(P<0.05)结论:细胞角蛋白19在肝癌细胞亚群中表达有差异,强阳性多数分布在0.05mg/LRho123组中,Rho123结合流式细胞分选术可以有效地分选出癌细胞中的肿瘤干细胞。

引用

页码：9272 / 9275

页数：4

共 2 条

[1] 细胞角质蛋白19与肝癌模型生长转移关系的探讨 [J].

李雁 ;

汤钊猷 ;

叶胜龙 ;

薛琼 ;

陈洁 ;

刘银坤 ;

钦伦秀 ;

田波 .

中华实验外科杂志, 2003, (10) :40-41

[2]

Isolation and Enrichment of Murine Spermatogonial Stem Cells Using Rhodamine 123 Mitochondrial Dye＜sup＞1＜/sup＞[J] . Kirk C. Lo,Victor M. Brugh, III,Michele Parker,Dolores J. Lamb.Biology of Reproduction . 2005 (3)

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