利用PCR法从文库中快速克隆人促红细胞生成素基因

被引：4

作者：

戴茹娟

李宁

陈永福

吴常信

机构：

[1] 中国农业大学国家农业生物技术重点实验室

[2] 中国农业大学动物科技学院北京

[3] 北京

来源：

农业生物技术学报 | 1996年 / 01期

关键词：

促红细胞生成素; PCR; 基因文库;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

本文介绍一种利用 PCR 技术从基因文库中快速克隆基因组 DNA 的方法。含有107个克隆的人基因文库分成10份,小量提取 DNA,利用特异性的寡核苷酸引物检测 EPO 基因的存在与否。经过4轮 PCR 筛选,从阳性管中取103个噬菌体进行铺板培养,经原位杂交获得含有 EPO 基因的阳性克隆。阳性克隆的插入片段被亚克隆到质粒上。酶切分析及序列分析的结果均证明我们获得了 EPO 基因。PCR—筛库法可以快速从文库中获得目的基因并节省大量的人力和资金,此方法同样适用于 cDNA 及 YAC 文库的筛选。

引用

页码：76 / 80

页数：5

共 5 条

[1]

Erythropoietin and the regulation of erythropoiesis Chicago,IL. Krantz S B,Jacobson L O. University of Chicago Press . 1970

[2]

Correction of the anemia of end-stage renal disease with recombinant human erythropoietin:results of a combined phase Ⅰ and Ⅱ clinical trials. Eschbach J W,et al. New England of Med . 1993

[3]

A PCR-based method for high stringency screening of DNA libraries. Israel D I. Nucleic Acids Research . 1993

[4]

Isolation and characterization of genomic and cDNA clones of human erythropoietin. Jacobs K,et al. Nature . 1985

[5]

Systematic screening of yeast artificial-chromosome libraries by use of the polymerase chain reaction. Eric D,Green,Maynard V Olson. USA:Proc Natl Acad Sci . 1990

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