TF-1细胞增殖法测定神经生长因子生物学活性的建立与应用

目的:建立并优化用于检测神经生长因子(NGF)生物学活性的TF-1细胞增殖法,并应用于重组人NGF和鼠NGF制品的活性检测。方法:将梯度稀释的人NGF国际参考品与TF-1细胞相作用,通过MTT法测定细胞增殖情况,建立测定NGF活性的TF-1细胞增殖法;从粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)残留、NGF加样稀释率、TF-1细胞接种浓度、培养时间等多个环节对实验条件进行优化;将建立的TF-1细胞增殖法应用于重组人NGF和鼠NGF的活性检测。结果:建立了用于NGF活性检测的TF-1细胞增殖法;实验条件优化结果表明,在无GM-CSF残留的情况下,将稀释至1/4的NGF样品与4×105/mL的细胞相互作用,培养48 h,可以得到更为典型的的四参数曲线;利用条件优化后建立的检测方法对重组人NGF和鼠NGF各2批样品分别进行4次测定,结果平均值分别为10.01×105、10.81×105和3.55×105、3.30×105U/mg,变异系数分别为7.5%、7.2%和7.2%、9.1%,检测结果稳定均一,表明检测方法具有很好的重复性。结论:建立并优化了用于NGF活性检测的TF-1细胞增殖法,该方法操作简便、定量准确、重复性好、稳定可靠,可有效应用于人NGF和鼠NGF制品的活性检测。