PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法

被引：40

作者：

胡晓红 ^{[1
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彭惠民 ^{[1
]}

刘昕 ^{[2
]}

黄正根 ^{[2
]}

袁科 ^{[2
]}

机构：

[1] 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室

[2] 第三军医大学分子遗传学教研室

来源：

重庆医科大学学报 | 2008年 / 02期

关键词：

DNA提取; PCR; 实时荧光定量PCR;

D O I：

10.13406/j.cnki.cyxb.2008.02.004

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。

引用

页码：155 / 158

页数：4

共 6 条

[1] 应用16SrDNA检测致病菌的研究进展 [J].