减蛋综合征病毒基因组Hind Ⅲ酶切片段的克隆及酶谱分析

以ｐＵＣ１９质粒为载体，采用鸟枪法克隆减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＥＤＳＶＨｉｎｄⅢ片段探针打点杂交，证实１３个克隆插入了ＥＤＳＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ片段。酶切分析结果表明，克隆到了Ａ、Ｂ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ７个不同大小的片段，选取含有上述插入片段的、具有代表性的７个相应质粒ｐＵＨＡ、ｐＵＨＢ、ｐＵＨＦ、ｐＵＨＧ、ｐＵＨＨ、ｐＵＨＩ、ｐＵＨＪ，在分别以ＢａｍＨＩ、ＢｇｌⅡ、ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＰｓｔⅠ、ＳｍａⅠ、ＸｂａⅠ、ＸｈｏⅠ单酶切的基础上，经适当组合的双酶切，得出各片段存在的单一酶切位点为Ａ：ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲＶ、ＳｍａⅠ、ＸｈｏⅠ位点；Ｂ：ＢｇｌⅡ、ＳｍａⅠ位点；Ｆ：ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲＶ位点；Ｇ：ＰｓｔⅠ位点；Ｈ：０；Ｉ：ＰｓｔⅠ位点；Ｊ：ＥｃｏＲＶ、ＸｈｏⅠ位点。为进一步筛选病毒复制非必需区，构建腺病毒表达载体，以及研究禽类腺病毒的分子生物学特性打下了基础。