粉尘螨Ⅱ类变应原的克隆表达、纯化及其免疫学特性

被引：10

作者：

朱健琦 ^{[1
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刘志刚 ^{[1
]}

高波 ^{[1
]}

吉坤美 ^{[2
]}

邢苗 ^{[1
]}

机构：

[1] 深圳大学生命科学学院

[2] 深圳市微生物基因工程重点实验室

来源：

免疫学杂志 | 2006年 / 02期

关键词：

粉尘螨; 变应原; 表达; 纯化;

D O I：

10.13431/j.cnki.immunol.j.20060059

中图分类号：

R392 [医学免疫学];

学科分类号：

100102 ;

摘要：

目的获得大量具有良好的IgE结合活性的Der fⅡ重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der fⅡ片段,产物连接进入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET-24a表达载体上,得到重组质粒pET-Der f2,工程菌经IPTG诱导培养,明显表达出Der fⅡ蛋白,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,用Western blot检测免疫学活性。结果成功提取粉尘螨的总RNA,扩增出编码129个氨基酸的长度为387个碱基对的核苷酸片段。序列分析结果和Genebank上的基因序列(D10448)同源性98%,其中有6个碱基不同。使用高效表达的原核载体pET,所得产物的5′端含有抗原性极小的6个组氨酸标签。表达质粒在E.coliBL21 star中得到高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,目的蛋白具有良好的变应原性。结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类变应原的原核表达载体,并纯化了具有免疫特性的重组蛋白,为进一步开展Der fⅡ蛋白和重组疫苗研究奠定了基础。

引用

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