山姜素通过促进H3K9去乙酰化抑制鼠巨噬细胞IL-6分泌的分子机制

目的通过检测鼠巨噬细胞(RAW246.7)IL-6启动子部位H3K9乙酰化修饰状态以及转录因子P40和CREB含量,初步揭示H3K9去乙酰化在山姜素调节RAW246.7炎症因子表达过程中的分子机制。方法 RAW246.7按照不同干预分为对照组、山姜素组(终质量浓度分别为50、100、200μg/ml),山姜素+GW9662组,山姜素+HDAC1(组蛋白去乙酰化酶1)或Pgene(对照质粒)Si RNA组,培养完成后ELISA法检测培基中IL-6水平,Western blot检测胞核PPAR、P40和CREB表达水平,并采用染色质免疫共沉淀(Chip-q PCR)检测RAW246.7 IL-6启动子部位结合的去乙酰化H3K9、P40以及CREB的相对表达水平。结果与对照组相比,山姜素呈剂量依赖性促进RAW246.7核内PPAR表达并遏制IL-6合成,可促进去乙酰化H3K9表达,并下调核内以及IL-6启动子结合的转录因子水平;GW9662遏制山姜素诱导的核内PPAR表达,逆转山姜素诱导的去乙酰化H3K9表达,同时恢复启动子部位、核内P40和CREB含量以及IL-6合成;HDAC1干扰对山姜素诱导的PPAR表达以及核内P40和CREB合成下降无显著影响,但可遏制山姜素诱导的去乙酰化H3K9表达,从而恢复IL-6启动子结合P40和CREB含量以及IL-6合成,但表达水平低于GW9662组。结论 PPAR激动剂山姜素通过激活去乙酰化酶促进IL-6启动子部位H3K9去乙酰化,以上改变可能干扰转录因子P40和CREB结合于启动子部位,从而干预IL-6表达,而H3K9去乙酰化不影响P40和CREB合成。