免疫磁珠捕获联合PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法学研究

被引:5
作者
王震 [1 ]
龚玉华 [2 ]
钱彩娣 [1 ]
孙春红 [2 ]
周丽萍 [3 ]
傅行礼 [3 ]
邵启祥 [3 ]
机构
[1] 镇江市第二人民医院检验科
[2] 镇江市第三人民医院检验科
[3] 江苏大学医学技术学院
关键词
结核分枝杆菌; 免疫磁珠捕获; 双内标; PCR-ELISA;
D O I
暂无
中图分类号
R446.61 [免疫学检验方法];
学科分类号
100208 ;
摘要
目的采用免疫磁珠捕获(IMC)联合双内标PCR-ELISA(IMC-PCR-ELISA)技术,建立定量检测结核分枝杆菌的方法。方法制备能够特异性捕获结核分枝杆菌的免疫磁珠(Dynabeads)。并根据结核分枝杆菌Mtp40基因序列以及结核分枝杆菌复合体群IS6110序列,设计2对特异性引物(上游引物的5′端用生物素修饰),以及2条与PCR扩增片段等长的内参照片段(其与扩增模板在引物区的序列相同)和3套捕获探针(3′端用地高辛标记)。先通过免疫磁珠特异性捕获结核分枝杆菌,再联合双内标PCR-ELISA技术检测结核杆菌。结果采用IMC-PCR-ELISA技术定量检测结核分枝杆菌,全过程约4h,检测限为5×103 copies/mL,当低内标模板浓度在30~70copies/mL,高内标模板浓度在8 000~12 000copies/mL时,计算出的浓度与实际加入的目的模板浓度之间有良好的线性关系(r2=0.998),未发现非特异性反应。结论成功建立了IMC-PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法,此方法具有快速、灵敏、特异、可定量的特点。
引用
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页数:3
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