目的:观察低氧对肾肌成纤维细胞合成和分泌结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)和细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响,以了解肌成纤维细胞在肾间质纤维化过程中的作用。方法:(1)采用原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,以密闭的细胞培养罐造成低氧环境(1%O2,体积分数),应用Westernblot方法检测低氧和正常氧(21%O2,体积分数)条件下低氧诱导因子-1α(hypoxiainducedfactor-1α,HIF-1α)蛋白的表达,验证所营造的低氧条件是可靠的。(2)用Westernblot方法检测在低氧和正常氧条件下,各时间点上细胞及上清液中CTGF和FN蛋白水平。(3)用RT-PCR方法检测低氧和正常氧条件下,各时间点FNmRNA表达的变化。(4)用明胶酶谱法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloprotei-nase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的活性。结果:正常氧组HIF-1α蛋白表达微弱,低氧组有较高水平HIF-1α蛋白表达。低氧作用于原代培养的肌成纤维细胞6h,12h和24h后细胞内的CTGF蛋白均比正常氧组增高,分别为175%±52%,347%±67%和143%±27%,以12h最明显(P<0.05);低氧刺激24h时上清液中CTGF蛋白显著增加,是正常氧组的348%±99%(P<0.05);低氧刺激肌成纤维细胞6h,12h和24h后上清液中FN蛋白水平增加,分别是正常氧组的187%±42%,199%±51%和210%±29%,以24h最明显(P<0.05),而对应时间点上清液中MMP-9和MMP-2活性无明显变化,但细胞内FN蛋白减少,低氧剌激6h为正常氧组的64%±13%。低氧刺激肌成纤维细胞3h,FN的mRNA水平开始上升,6h达到正常氧组的135%±13%(P<0.05),12h下降接近正常氧水平。结论:低氧可通过促进肌成纤维细胞表达CTGF和FN参与肾间质纤维化的进展。
