几种乙型肝炎病毒DNA重组质粒的改建及其在哺乳动物细胞高效表达乙型肝炎表面抗原

将BglⅡ不完全水解pTHBV-1质粒产生的两种乙型肝炎病毒（HBV）DNA片段插入pSV2-dhfr质粒的BgⅢ切口,构造成4种重组质粒,其结构特点是:1.都含有SV40的DNA复制起点和早期启动子;2.都含有二氢叶酸还原酶基因（dhfr）;3.4种重组质拉是在dhfr基因3′末端分别插入两种大小不同,方向相反的HBV DNA片段而成。使用这4种质粒DNA分别和tk质粒DNA共转化Ltk-细胞,在HAT培养基选择压力下4种质粒都得到有效表达HBsAg。通过换用氨甲喋呤并逐渐增加其药量,从氨甲喋呤抗性细胞中获得高效表达HBsAg的B2和B16细胞系。据固相放射免疫检测结果计算,B16细胞系的HBsAg分泌量可达12.5μg/10～7细胞/天。细胞传代4个月表达稳定。这些细胞在HBsAg诊断试剂和疫苗研制中具有潜在的应用价值。