小鼠NGF基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

被引：7

作者：

宋玫

陈绍宗

机构：

[1] 第四军医大学唐都医院整形外科,第四军医大学唐都医院整形外科陕西西安,陕西西安

来源：

细胞与分子免疫学杂志 | 2003年 / 02期

关键词：

β神经生长因子; 重组表达载体; NIH3T3细胞系; 基因转染; 脂质体FuGENETM6;

D O I：

10.13423/j.cnki.cjcmi.003061

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的 :构建小鼠 β NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3细胞系中NGF的表达情况。方法 :用基因重组技术 ,将小鼠 β NGF的成熟cDNA序列及其前导序列 ,克隆到真核表达载体 pcDNA3.1+中 ,用限制性内切酶酶切鉴定重组体。利用脂质体FuGENETM6方法 ,转染NIH 3T3细胞。转染后 72h ,用G4 18筛选阳性克隆并培养至 2 0d。对阳性克隆培养上清中NGF的表达用Westernblot分析并观察该上清中NGF对PC12细胞突起生长的作用。结果 :β NGF基因在NIH 3T3细胞中获得表达。阳性克隆培养上清能促进PC12细胞突起生长。结论 :重组真核表达载体 pcDNA3.1+/NGF构建成功 ,NGF蛋白在NIH 3T3细胞中表达 ,并具有良好的生物学活性 ,为进一步开展NGF基因治疗神经系统疾病奠定了基础

引用

页码：124 / 126+129 +129

页数：4