胚胎干细胞直接向神经细胞诱导分化的实验研究

目的:探讨不经拟胚体(EB)培养阶段,应用维甲酸(RA)在体外直接将胚胎干细胞(ESC)诱导分化为神经细胞的可行性和效果。方法:ESC消化后分为A、B、C、D 4组,A、B组进行EB培养后,A组用RA进行诱导分化,B组不添加RA使其自由分化,C、D组不经EB培养阶段,C组直接用RA诱导分化,D组自由分化。倒置相差显微镜及扫描电镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学及流式细胞术观察各组第9 d分化细胞微管相关蛋白-2(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果:A、C组诱导分化的神经样细胞逐渐增多,并形成密集的神经网络样结构,9 d时大部分为MAP-2阳性细胞,MAP-2阳性率显著高于B、D组(P<0.01)。B、D组以圆形上皮样分化细胞为主,9 d时绝大部分为GFAP阳性细胞,GFAP阳性率显著高于A、C组(P<0.01)。A、C组之间或B、D组之间的MAP-2及GFAP阳性率均无显著差异(P>0.05)。结论:在体外,可不经EB阶段,应用RA直接将ESC诱导分化为神经细胞,改良的ESC诱导分化方法与传统的RA4-/4+方法效果相同,可取代传统方法。