一种检测聚合酶链反应产物的新方法

<正> 笔者建立了一种新型的用96孔板对聚合酶链反应(PCR)产物进行检测的方法,报告如下。一、材料和方法1.检测原理:将 PCR 反应中的一个引物用生物素标记,并且在延伸过程中掺入 Dig-11dUTP,使扩增产物带有生物素和地高辛双重标记,随后 PCR 产物被链霉亲和素包被的固相载体所捕获,接着由抗地高辛抗体的碱性磷酸酶与 PCR 产物中的地高辛相结合。检测系统能运用碱性磷酸酶的不同底物,通过显色、荧光或化学发光来得到结果。2.血清标本:10例乙型肝炎(乙肝)阳性血清及10例无肝炎史的阴性血清均由上海市传染病医院提供。3.DNA 聚合酶购自复华公司,对硝基苯磷酸酯(PNPP)购自 Sigma 公司,2-氨基-2-甲基丙醇(AMP)、封闭试剂、Dig-11dUTP 和抗地高辛抗体相连的碱性磷酸酶均购自 Boehringer Mannheim 公司。