结核分支杆菌利福平药物敏感性的直接快速检测

目的探讨利用分子生物学方法直接快速检测临床标本结核分支杆菌利福平（ＲＦＰ）药物敏感性的可行性。方法自行设计针对ｒｐｏＢ基因特异扩增的引物（扩增产物为１８３ｂｐ片段），运用聚合酶链反应 单链构象多态性（ＰＣＲ ＳＳＣＰ）银染色法，检测４５株结核分支杆菌临床分离株，对其中部分菌株进行ｒｐｏＢ基因ＤＮＡ序列分析；运用ＰＣＲ ＳＳＣＰ银染色法对７０份结核病患者痰标本进行直接快速检测，并与药敏试验结果做对照分析。结果４５株临床分离株中１６株ＲＦＰ敏感结核分支杆菌ＳＳ ＣＰ带谱与结核分支杆菌标准株（Ｈ３７Ｒｖ）相同，２９株ＲＦＰ耐药株中有２６株检测到突变图谱，阳性率为９０％。从具有ＳＳＣＰ特征性带谱的菌株中筛选８株临床分离株进行ｒｐｏＢ基因序列分析显示：１株ＲＦＰ敏感株无ｒｐｏＢ基因突变，７株耐药株均发生碱基突变（符合率１００％）。碱基以单点突变为主，以５３１位碱基突变最为多见［４株５３１位ＴＣＧ→ＴＴＧ，Ｓｅｒ→Ｌｅｕ（５７％）；１株５３１位ＴＣＧ→ＣＡＧ，Ｓｅｒ→Ｇｌｎ（１４％）；２株５２６位ＣＡＣ→ＴＡＣ，Ｈｉｓ→Ｔｙｒ（２９％）］。与ＢＡＣＴＥＣ对照临床痰标本直接快速检测阳性率为６４％。结论结核分支杆菌耐ＲＦＰ