DNA断裂点标记法检测凋亡优于DNA含量分析法

本文以地塞米松（25mg／kg）腹腔注射10h后诱导的BALB／c鼠（n=5x）胸腺细胞作为凋亡阳性细胞，比较了碘化丙啶（PI，propidiumiodium）染色DNA含量分析和TUNEL（TdT—mediatedX-dUTPnickendlabeling）标记DNA断裂点分析两种方法在检测凋亡中的差异。流式细胞仪分析结果表明，PI检测凋亡的阳性率29．3±8．1％（x±s）明显低于TUNEL检测的阳性率（40．2±8．7％），P<0．01（配对t检验）。进一步用PI和TUNEL双参数分析显示，在PI检测阳性的颗粒中有4．7±2．2％是TUNEL检测阴性的，即没有DNA断裂点的增加，这些颗粒很可能是细胞碎片，它们导致了PI检测的假阳性。另外TUNEL阳性的细胞中有42．8±10．6％处在S期和G2／M期，因而用PI检测为阴性，造成PI方法的漏检，即假阴性。我们的资料表明，PI检测凋亡与TUNEL相比有很高的漏检率和一定的假阳性，因此PI只适用于凋亡初步分析。要进行准确的定量分析应该用TUNEL法。