重组人类肥胖抑素抗血清的研究

目的　研究重组人类肥胖抑素抗血清的制备及应用。方法　以高度纯化的体外重组肥胖抑素免疫兔子 ,获得兔抗人类肥胖抑素抗血清 ,应用双向免疫扩散电泳、免疫沉淀法、蛋白质印迹法及放射免疫法鉴定其滴度并研究应用其检测重组肥胖抑素的特异性和灵敏度 ,建立标准曲线并应用免疫沉淀法和蛋白质印迹法进行临床样本的初步检测。结果　双向免疫扩散电泳测定抗血清滴度为1∶16。应用放射免疫法确定抗血清工作稀释度为 1∶2 0 0 0 ,并建立检测范围在 0 78～ 10 0 μg/L的标准曲线。应用免疫沉淀法结合蛋白质印迹法进行检测 ,可见抗血清与重组人类肥胖抑素特异性结合 ,检测灵敏度可达 1μg/L ;抗血清与儿童血浆中肥胖抑素特异性结合 ,吸光度扫描定量为 10 μg/L。同时以具有生物活性的重组人类肥胖抑素作为免疫原所获得的抗体与变性及非变性重组蛋白均可特异性结合。结论　获得特异性兔抗人类肥胖抑素抗血清 ,并可用于临床检测生物样品中的肥胖抑素水平。应用该抗血清检测重组及天然人类肥胖抑素的特异性及灵敏性较高