细菌体内同源重组构建pAdEasy-1-hNGFβ重组体

被引：11

作者：

王清秀

钟和英

周青山

王家宁

黄永章

余开峰

马大青

姚尚龙

机构：

[1] 华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科,郧阳医学院附属人民医院麻醉科、临床医学研究所,武汉大学人民医院麻醉科,郧阳医学院附属人民医院麻醉科、临床医学研究所,郧阳医学院附属人民医院麻醉科、临床医学研究所,郧阳医学院附属人民医院麻醉科、临床医学研究所,英国皇家学院麻醉与重症监护研究室,华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科武汉郧阳医学院附属人民医院麻醉科、临床医学研究所,十堰,十堰武汉大学人民医院麻醉科,武汉,武汉,十堰,十堰,十堰,伦敦SWNH,武汉

来源：

华中科技大学学报(医学版) | 2005年 / 03期

关键词：

同源重组; 腺病毒; 人β神经生长因子;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q784 [基因的重组];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的采用细菌内同源重组法高效制备含神经生长因子β基因(hNGFβ)的重组腺病毒质粒。方法hNGFβ自载体pBLAST44hNGFβv02中切出,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ,自pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ中酶切出hNGFβDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV中,形成转移质粒pShuttleCMVhNGFβ,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy1同源重组,得到重组腺病毒载体pAdEasy1hNGFβ。结果线性化的pShuttleCMVhNGFβ转化含pAdEasy1的高效感受态大肠杆菌BJ5183,24h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得大于20kb的大片段和4.5kb的特征性条带,PCR反应扩增出731bp片段。结论应用细菌内同源重组能快速构建含hNGFβ基因的重组腺病毒载体pAdEasy1hNGFβ,为hNGFβ基因的研究及应用奠定了基础。

引用

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