反转录聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

本研究成功地建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)的反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术。根据PRRSV两个标准毒株 (美洲ATCCVR 2 332株及欧洲LV株 )膜蛋白和核衣壳蛋白的编码序列差异 ,自行设计合成了各自的引物 ,对两标准毒株及广州分离株 (CDG9512 )进行扩增 ,获得了预期长度约为 1kb的扩增片段。酶切鉴定 ,结果进一步证实两标准毒株间基因差异显著 ,分离株与美洲株更为接近 ,而不同于欧洲株。对猪伪狂犬病病毒、细小病毒、猪瘟病毒、传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒及空白对照进行扩增 ,结果均为阴性。该技术能检测到病毒达 10 2 .5TCID50的水平。表明RT PCR对PRRSV的检测不仅具有特异、敏感、快速诊断的优点 ,而且还可以对毒株的基因类型加以鉴别。在RT PCR技术检测PRRSV方法上也进行了改进与探讨。