短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯和性质的研究

由短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）209产生的胞外碱性蛋白酶的粗酶制剂（5×10～4u/g）,经硼砂NaOH缓冲液抽提,硫酸铵沉淀,Sephadex G-25脱盐,DEAE-纤维素柱层析,冷冻干燥获得部分纯化的酶。纯酶的活力为199×10～4u/g,比活力提高2.6倍。此酶的最适pH8.5—9.0,在pH6—10之间稳定,因此是属于微碱性蛋白酶。最适温度为50℃,在50℃以下稳定,在60℃处理10分钟活力损失95%。0.003M Ca2+的存在对酶的热稳定性和pH稳定性均有显著提高。Ag+,Cu2+,Fe2+,Hg+,Zn2+对酶有抑制作用;Mn2+有明显的激活作用;1×10-3M的PCMB,IAA,O-PTH,PMSF对活力无影响;1×10-3M EDTA对酶有30%的抑制作用;在40℃用NBS(1×10-4M)、DFP（2.5mM） 对酶进行10分钟处理,酶活力完全损失。此酶能水解多种天然蛋白,如酪蛋白、血红蛋白、蛇毒蛋白等,不水解鱼精蛋白和溶菌酶。以酪蛋白为底物测得的km值为0.66×10-2g/ml。在pH7.3进行圆盘凝胶电泳,虽然呈现九条带,但均具有大小不等的蛋白酶活力。