含RGD肽基因导入系统介导TGFβ1基因转染骨髓基质干细胞的瞬时表达与稳定表达

目的评价含RGD肽基因导入系统K16GRGDSPC(简记作K16-RGD)作为新型基因转染载体的可行性,并探讨转化生长因子β1(TGFβ1)基因转染骨髓基质干细胞(BMSCs)的表达能力。方法固相合成法合成K16-RGD。以6μgK16-RGD:2μgpcDNA3-TGFβ1(pTGFβ1)比例转染第三代兔BMSCs,转染72h后通过免疫组织化学染色和图像分析检测TGFβ1的瞬时表达水平;G418筛选2周形成阳性克隆,扩大培养后同法检测TGF-β1的稳定表达水平。通过酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测TGF-β1的表达分析转染的量效关系和时效关系。结果瞬时转染组免疫组化部分细胞呈强阳性,稳定转染组几乎全部细胞呈强阳性并且持续表达4周以上。图像分析显示瞬时转染组和稳定转染组TGF-β1的表达均比对照组显著增强(P<0·01),且稳定表达组明显高于瞬时表达组(P<0·05)。ELISA法检测量效关系显示,转染体系中K16-RGD(μg)∶pTGFβ1(μg)为3∶1时TGFβ1有最高的表达效率;时效关系显示,稳定转染组TGFβ1的表达比瞬时表达组高(P<0·05)。结论含RGD肽基因导入系统K16-RGD作为基因转染载体是可行的,TGFβ1基因转染BMSCs可有效表达TGFβ1,为下一步利用K16-RGD作为载体构建载TGFβ1基因骨基质材料进行骨缺损修复研究奠定了基础。