丙型肝炎病毒NS3蛋白人源基因工程单链抗体的表达

目的在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达可溶性的抗ＨＣＶ非结构蛋白ＮＳ３的人源单链可变区抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＳＣＦＶ）。方法以重组的 ＨＣＶ ＮＳ３为抗原，利用噬菌体抗体库技术筛选含有抗－ＨＣＶ ＮＳ３ ＳＣＦｖ基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒，经ＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ酶切鉴定后，亚克隆到ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ载体；转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，提取质粒进行ＤＮＡ序列测定；异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏ－β－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ，ＩＰＴＧ）诱导表达 ＨＣＶ ＮＳ３可溶性单链可变区抗体。 ＥＬＩＳＡ和斑点吸印杂交检测其与不同来源的抗原的结合活性。结果筛选到的ＨＣＶ ＮＳ３的单链抗体基因，经限制性内切酶酶切和序列分析表明，该抗体基因由 ７５０ｂｐ组成， ＥＬＩＳＡ和斑点吸印杂交结果表明，在大肠杆菌 ＸＬＩ-Ｂｉｌｌ６中表达的 ＨＣＶ ＮＳ３的单链抗体，可与不同来源的ＮＳ３抗原结合。结论大肠杆菌ＸＬＩ－Ｂｌｕｅ表达的ＮＳ３－ＳＣＦＶ具有结合不同来源的ＨＣＶＮＳ３的活性和特异性。