产气肠杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达及影响重组酶活性的因素

用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从产气肠杆菌（ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ） 中克隆出０９ｋｂ 的 Ｄ Ｎ Ａ 片段，经 Ｄ Ｎ Ａ 测序证明是α 乙酰乳酸脱羧酶（α ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ ，α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ） 基因。将α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ基因重组到质粒ｐ Ｂ Ｖ２２０ 后，转化大肠杆菌，经筛选获得高效表达的重组子菌株。重组α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ 基因表达量占菌体总蛋白量的２７ ％ 。酶活检测表明重组子细胞表达的α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ 活性是产气肠杆菌的１２０００ 倍。另外，粗提的重组α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ 的最适ｐ Ｈ 为６５ ～７０ ，ｐ Ｈ 稳定范围为５５ ～８０ ，适合的温度为３５ ～４５ ℃。 Ｂａ２ ＋ 、 Ｃｄ２ ＋ 、 Ｆｅ２ ＋ 、 Ｃｏ２ ＋ 、 Ｍｎ２ ＋ 、 Ｓｎ２ ＋ 可提高重组α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ 的活性。氨基酸修饰剂可降低其活性。