转化生长因子β1mRNA检测方法的建立

目的：研究血吸虫病肝纤维化发病机理、确定肝纤维化活动程度、判断治疗效果和预后等，建立定量ＰＣＲ法。方法：从引物合成构建质粒始，建立ＲＴ－ＰＣＲ加ｄｏｔｂｌｏｔ法测ＰＢＭＣ中ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ水平，以构建的ＴＧＦ－β１质粒，精确定量后作标准对照，以看家基因β－ａｃｔｉｎ同管进行ＲＴ－ＰＣＲ为内对照，ｄｏｔｂｌｏｔ结果以多功能凝胶成像仪ＩＳ－１０００定量分析，检测梯度稀释的质粒和１１份不同血标本的复管。结果：８个梯度稀释的ＴＧＦ－β１质粒ＰＣＲ产物定量结果与原浓度对数成正比，１１份标本两次结果为１．７１±０．９０和１．５４±０．８８，显示较好的重复性和稳定性。结论：该方法可用于定量分析ＰＢＭＣ中ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ含量。