玉米细菌性枯萎病菌16S rDNA基因克隆及TaqMan探针实时荧光PCR

被引：14

作者：

漆艳香

肖启明

朱水芳

机构：

[1] 湖南农业大学植物保护学院

[2] 国家质检总局动植物检疫实验所湖南长沙　

[3] 湖南长沙　

[4] 北京　

来源：

湖南农业大学学报(自然科学版) | 2003年 / 03期

关键词：

玉米细菌性枯萎病菌; 16SrDNA; TaqMan探针;

D O I：

10.13331/j.cnki.jhau.2003.03.003

中图分类号：

S435.13 [玉米病虫害];

学科分类号：

摘要：

为给农业和植物检疫部门提供一种特异性强、灵敏度高,可以快速、直接检测植物病原菌的方法,将玉米细菌性枯萎病菌16SrDNA基因克隆测序,根据该细菌与其他细菌菌株16SrDNA序列差异,设计出对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定点突变的特异性探针,除泛菌属3个种和欧氏菌属3个种外,还对假单胞菌属1个种,黄单胞菌属1个种,棒形杆菌属1个种,短小杆菌属1个种以及5种植原体进行了实时荧光PCR检测.结果表明:只有玉米细菌性枯萎病菌产生荧光,其他细菌和植原体都没有荧光产生.检测的灵敏度为104CFU/mL的菌悬浮液,相当于4个细菌细胞的基因,灵敏度高,也就是说,反应体系中只要有2个活细菌,实时荧光PCR就能检测到.相对灵敏度为107CFU/mL,而且整个检测过程只需2h,由于实验采用独特全封闭反应管及光电传导系统,不用凝胶电泳,降低了污染.

引用

页码：183 / 187

页数：5

共 4 条

[1]

16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study. WillamG Weisburg,Susan M,Barns,et al. Journal of Bacteriology . 1991

[2]

Polymerase chain reaction used in the development of a DNA probe to identify Erwinia stewartii, a bacterial pathogen of maize. Blakemore E J A,Reeves J C,Ball S F L. Seed Science and Technology . 1992

[3]

Assessment of phenotypic variability in Erwinia stewartii based on metabolic profiles. Wilson W J,Dillard H R,Beer S V. Plant Disease . 1999

[4]

Detection of root mat associated Agrobacterium strains fromplant material and other sample tyres by post -enrichment TaqMan PCR. Weller S A,Dteacl D E. Journal of Applied Microbiology . 2002

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