人骨形态发生蛋白-2真核表达载体的构建

被引：6

作者：

栗向东

胡蕴玉

蒲勤

朱邦福

机构：

[1] 第四军医大学西京医院全军创伤骨科研究所!(西安,),第四军医大学西京医院全军创伤骨科研究所!(西安,),第四军医大学西京医院生物化学教研室,第四军医大学西京医院生物化学教研室

来源：

中国修复重建外科杂志 | 2001年 / 03期

关键词：

骨形态发生蛋白; 基因转染; 成纤维细胞;

D O I：

暂无

中图分类号：

R68 [骨科学（运动系疾病、矫形外科学）];

学科分类号：

1002 ; 100210 ;

摘要：

目的　构建人骨形态发生蛋白 - 2 (h BMP- 2 )真核表达载体 ,并观察其在真核细胞内表达的可能性。方法　 Sal I和 Xba I双酶切含有 h BMP- 2全长 c DNA的 p U C19,回收 1.2 4kb片段 ,将其连入真核表达载体pc DNA3,构建重组子 pc DNA3- h BMP- 2。将重组子转化细菌 ,扩增后提取质粒 ,分别用 Eco R I和 Xba I双酶切和Xho I单酶切后琼脂糖凝胶电泳鉴定。将重组子转染成纤维细胞 ,G418筛选形成阳性克隆后继续培养 4周行细胞原位杂交和免疫组织化学染色。结果　琼脂糖电泳显示 :用 Eco R I和 Xba I双酶切后可形成两条带 ,大小分别为1.3kb和 5 .38kb,而 Xho I酶切位点消失 ,符合物理图谱 ,表明载体构建成功。转染后 G418筛选所获阳性克隆 ,继续培养 4周 ,细胞原位杂交和免疫组织化学染色 ,结果表明 h BMP- 2基因在 m RNA水平和蛋白水平均有表达。结论成功构建 h BMP- 2真核表达载体 ,该载体可在真核细胞内表达 ,为将来骨损伤的基因治疗奠定了一定的实验基础

引用

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