人参皂甙单体Rh2诱导髓性白血病细胞株凋亡的时效与量效

目的:已发现人参中某些有效组分能增强和激活机体免疫系统,具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性作用。选取人髓性白血病细胞株HL60为模型,探讨人参皂甙单体Rh2抑制其增殖和诱导凋亡的时效量效关系。方法:实验于2006-07/08在吉林医药学院临床检验实验室进行。①材料:人参皂甙单体Rh2购自吉林省宏久生物科技股份有限公司,批号050801,溶于pH7.4磷酸盐缓冲液中配成50g/L母液。人髓性白血病细胞株HL60购自中国科学院上海生物细胞研究所。②实验方法:取处于对数生长期的HL60细胞制备3×108L-1细胞悬液,接种后6h分别加入终浓度为5,10,20,40,80mg/L的人参皂甙单体Rh2100μL,于加药48h后采用MTT比色法检测人参皂甙单体Rh2对HL60细胞生长的抑制作用,计算抑制率和半数抑制浓度。选择半数抑制浓度的人参皂甙单体Rh2处理HL60细胞,分别于作用6,12,24,48,72h后采用MTT比色法测定抑制率,并与未加药对照组进行比较。半数抑制浓度的人参皂甙单体Rh2作用48h时倒置显微镜下观察HL60细胞形态,吉姆萨染色观察细胞凋亡情况。结果:①量效关系:人参皂甙单体Rh2浓度为5,10,20,40mg/L时,处理48h后HL60细胞生长抑制率呈升高趋势(F=9.45,P<0.01),具有明显的剂量依赖性;至80mg/L时抑制率与40mg/L基本相似。加药48h后半数抑制浓度为13.0mg/L。②时效关系:13.0mg/L人参皂甙单体Rh2处理HL60细胞6,12,24,48,72h后,抑制率逐渐升高(F=9.32,P<0.01),呈时间依赖性。③HL60细胞形态观察:与未加药对照组比较,经13.0mg/L人参皂甙单体Rh2处理后HL60细胞数量明显减少,细胞分散,体积缩小,细胞核呈碎片状。④凋亡细胞吉姆萨染色检测:经13.0mg/L人参皂甙单体Rh2处理后,HL60细胞出现核染色质浓缩、呈周边凝聚,核膜裂解形成凋亡小体、胞质出现空泡但胞膜完整的典型细胞凋亡形态学改变。结论:人参皂甙单体Rh2能有效抑制体外培养HL60细胞的增殖,并诱导其凋亡,干预效果呈时间和剂量依赖。