大鼠胚胎脑源性神经干细胞的分离培养和鉴定

被引：4

作者：

唐巍 ^{[1
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王键 ^{[2
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胡建鹏 ^{[3
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陈业农 ^{[4
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韩小祥 ^{[4
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程红 ^{[4
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俞丽华 ^{[4
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机构：

[1] 安徽中医学院针灸骨伤临床学院康复教研室

[2] 安徽中医学院中医临床学院中医基础理论教研室

[3] 安徽中医学院中西医结合临床学院病理教研室

[4] 安徽中医学院中医临床学院

来源：

中国临床康复 | 2006年 / 11期

关键词：

神经干细胞; 增殖; 分化; 细胞培养;

D O I：

暂无

中图分类号：

R329.2 [人体细胞学];

学科分类号：

摘要：

目的:分离培养大鼠胚胎脑源性神经干细胞,并进行增殖分化鉴定。方法:实验于2005-06/12在中国科学技术大学生命科学学院周江宁研究室进行。①自孕14dWistar大鼠胚胎分离大脑皮质及皮质下组织,经机械吹打分离成单细胞后,利用无血清原代及传代培养方法,在添加重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子和B27添加剂的DMEM/F12(1∶1)培养基中进行悬浮培养,获得具有克隆能力的细胞群;用有限稀释法,得到来源于同一细胞的亚细胞系克隆。②从培养基中撤除生长因子和B27添加剂,换成含体积分数为0.1的胎牛血清的DMEM/F12培养基,将培养的细胞球接种于预先铺有多聚赖氨酸盖玻片的培养皿,诱导分化。③以免疫荧光细胞化学技术,用神经干细胞的特异性单克隆抗体(巢蛋白)和增殖细胞单克隆抗体(5-溴脱氧尿苷嘧啶)鉴定克隆细胞,以鉴定神经干细胞的自我更新增殖能力。④以免疫荧光细胞化学技术,用神经细胞的特异性抗体(神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂)鉴定分化细胞,以鉴定神经干细胞的多向分化潜能。结果:①从胎鼠大脑皮质及皮质下分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,并具有增殖的能力,表达神经上皮干细胞蛋白抗原和增殖细胞抗原。②在血清诱导下,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞3种神经细胞的特异性抗原。结论:运用上述方法分离培养的细胞具有自我更新和增殖能力,并具有多向分化潜能和具有神经干细胞的特异性抗原。

引用

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