缺氧微环境对宫颈癌Hela细胞HIF-1α及VEGF-A表达的影响

目的:研究在缺氧微环境下人宫颈癌Hela细胞中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子A（VEGF-A）的表达。方法:采用CoCl2构建Hela细胞体外缺氧微环境模型,使用CCK8法来检测细胞的增殖;使用实时荧光定量PCR法分别来检测HIF-1α和VEGF-A m RNA表达的变化;免疫细胞化学技术检测HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达。结果:CCK8检测结果发现,CoCl2诱导的缺氧微环境能降低Hela细胞的增殖活性,随着CoCl2浓度的增加其增殖活性逐渐降低,在150μmol/L时降到最低,各浓度组间总体差异有统计学意义（F=10.118,P=0.001,P<0.05）,在相同CoCl2浓度构建的缺氧微环境中,随着缺氧时间的延长,其细胞增殖活性逐渐降低,在12 h降至最低,而后增殖活性增加,各时间组总体差异有统计学意义（F=9.727,P=0.002,P<0.005）。实时荧光定量PCR结果发现同对照组比较,缺氧处理3 h,HIF-1α和VEGF-A的m RNA表达无明显差异（P=0.86,P=0.72,P>0.05）;随着缺氧时间增加,HIF-1α的m RNA表达在12 h时达峰值,随后下降,各时间组比较差异有统计学意义（F=1.627,P<0.001）。VEGF-A m RNA表达随着缺氧时间的增加逐渐增加,各时间组比较差异有统计学意义（F=7.407,P<0.001）。HIF-1α和VEGF-A在m RNA表达水平上无相关性（r=0.647,P>0.05）;免疫细胞化学检测发现,在150μmol/LCoCl2构建的缺氧微环境下,随着时间延长HIF-1α蛋白表达逐渐增加,在12 h达到峰值,而后下降（F=100.930,P<0.001）;VEGF的蛋白表达随时间延长而逐渐增加（F=118.336,P<0.001）。HIF-1α和VEGF-A在蛋白表达水平上呈正相关（r=0.892,P<0.05）。结论:CoCl2诱导的缺氧微环境能使Hela细胞中HIF-1α的表达,促进其下游靶基因VEGF-A在m RNA及蛋白水平表达升高。