水稻OSNADK3基因的克隆及其遗传转化

从韩国浦项科技大学（Pohang University of Science and Technology,POSTECH）水稻T-DNA插入突变体库PFG3A-04871.R株系中筛选到一个NADK3（NAD Kinase 3）激酶（LOCOs05g32210）基因OSNADK3表达缺失的突变杂合体。与其野生型Dongjing（Oryza sativa L.var.japonica cv Dongjing）比较,该OSNADK3基因突变杂合体表现出明显的植株矮小、花发育异常以及不育等特点。为明确水稻NADK3激酶的功能,我们利用RT-PCR的方法克隆了水稻（Dongjing）OSNADK3基因的编码区（CDS）,将OSNADK3导入表达载体pCAMBIA1301::35S::GFP（pCG）中,构建了OSNADK3和绿色荧光蛋白（GFP）融合表达载体pCAMBIA1301::35S::NADK3::GFP（pCNG）,该融合表达载体能够在拟南芥叶中表达,亚细胞组织定位分析表明,OSNADK3在拟南芥细胞质中表达,表明该酶是细胞质定位的酶类。然后,利用农杆菌介导的方法侵染水稻愈伤组织,获得了24株独立的转基因水稻植株。经PCR初步鉴定,目的片段OSNADK3已经成功整合到水稻基因组中,为进一步深入研究水稻OSNADK3的功能与作用机制奠定了基础。