人骨形成蛋白-2的cDNA探针的实验合成

目的利用分子生物学实验技术合成并标记人骨形成蛋白-2(hBMP-2)的cDNA探针。方法从人髁状突骨折标本中提取总RNA,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,扩增出hBMP-2成熟肽编码区基因的cDNA片段,将其插入pGEM-T质粒中,并转化到大肠杆菌;挑选阳性克隆培养,提取重组质粒,并作核苷酸序列分析;用限制性内切酶单酶切后,再经地高辛标记检测试剂盒随机引物法标记,合成地高辛标记的BMP-2cDNA探针;利用这一探针作人颌骨成骨性骨肉瘤标本中BMP-2mRNA表达的原位杂交研究,以鉴定探针的可靠性。结果通过实验方法合成了hBMP-2cDNA探针,利用这一探针的原位杂交研究证实颌骨成骨性骨肉瘤中有BMP-2mRNA表达。结论自行合成并标记的人BMP-2cDNA探针,性状稳定、可靠,能够应用于BMP-2mRNA表达的原位杂交研究。