TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡与磷脂酰肌醇3激酶/丝/苏氨酸激酶通路的研究

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸激酶(serine thre-onine kinase,AKT)通路在基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMC)凋亡中的作用和机制。方法(1)脂质体法将正、反义人TIMP-1(hTIMP-1)及空载体转染到大鼠肾小球系膜细胞。(2)Annexin V/PI双染法流式检测系膜细胞凋亡率。(3)Caspase9/Mch6Colorimetric Assay试剂盒检测Caspase9活性。(4)Western blot检测BAD、phospho-BAD、AKT、phospho-AKT蛋白水平。结果与对照组(1·06±0·08)%相比,正义转染组细胞凋亡率降低[(4·51±0·50)%,P<0·05],反义转染组凋亡率显著提高[(24·97±3·64)%,P<0·05],LY294002的加入可部分抵消TIMP-1的抗凋亡作用。TIMP-1的高表达可下调Caspase9活性(0·111±0·064,P<0·05),低表达可上调Caspase9活性(0·461±0·012,P<0·05)。正义TIMP-1能提高细胞phos-pho-BAD、phospho-AKT的蛋白水平,而反义TIMP-1的两种蛋白水平明显减少,且该作用可被LY294002阻断。结论(1)PI3K/AKT通路参与TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程。(2)BAD在其中起重要作用。(3)AKT对Caspase9的抑制亦起主要作用。