用改良消减杂交筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中高表达基因

被引：5

作者：

王吉村

药立波

吕厚山

刘新平

邓艳春

聂晓燕

孙铁铮

燕太强

机构：

[1] 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,北京大学人民医院骨关节中心!北京,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,第四军医大学生物

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2001年 / 02期

关键词：

改良消减杂交法; 类风湿性关节炎; 滑膜细胞; 高表达基因;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2001.02.024

中图分类号：

R593.22 [类风湿性关节炎];

学科分类号：

1002 ; 100201 ;

摘要：

为了研究类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞 (fibroblast- like synovialcells,FLS)过度增殖和破坏软骨的分子机理 ,利用改良消减杂交法以骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)病人滑膜细胞为对照 ,筛选 RA滑膜细胞中的高表达基因 .将得到的基因片段克隆入质粒载体 ,通过反向点杂交排除假阳性克隆后 ,将阳性克隆进行核酸序列分析 ,最后用 Northern杂交方法检测一些高表达基因在 RA和 OA病人滑膜细胞中的表达水平 .结果显示 ,共分离到 1 50个 RA高表达基因片段 ,其中长于 1 0 0 0 bp的片段占 8% (1 2 /1 50 ) ,长于 40 0 bp的片段占 36.7% (55/1 50 ) ,在大于 40 0 bp的片段中 ,假阳性率为 2 3.7% (1 3/55) .在测序的 1 8个片段中 ,已知基因有 1 2个 ,其中包括 IGF- 1结合蛋白 (IGFBP)特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B等 .新序列有 6个 ,其中两个序列分别与 Ring- box蛋白 1和 SON DNA结合蛋白同源 .对 IGFBP特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B基因的 Northern杂交分析显示 ,在 RA病人滑膜细胞中 ,这些基因的表达水平高于 OA病人滑膜细胞 .这些结果提示 ,这种改良消减杂交法是一种简便有效的分离差异表达基因的方法 ;IGF- 1结合蛋白特异性丝氨酸蛋白酶、层粘

引用

页码：244 / 249

页数：6

共 3 条

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