抗HBsAg Fab片段和α-干扰素融合蛋白的克隆及表达

目的为深入研究乙型肝炎的生物导向治疗，构建以人抗乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段为导向作用、αＡ－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）为治疗作用的融合蛋白Ｆａｂ／ＩＦＮ－αＡ原核表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ。方法用ＰＣＲ体外扩增目的基因ＩＦＮ－αＡ，并在其ＤＮＡ两端引入酶切位点及５′端人工合成的Ｌｉｎｋｅｒ，重组人抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段表达载体ｐＨＳ相应酶切位点，酶切和ＤＮＡ测序鉴定筛选出阳性克隆，转化大肠杆菌，经ＩＰＴＧ诱导表达。结果目的基因正确正向插入载体，重组表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ能在大肠杆菌表达出具有双重生物活性的融合蛋白Ｆａｂ／ＩＦＮ－αＡ。结论融合蛋白Ｆａｂ／ＩＦＮ－αＡ的成功构建及在大肠杆菌的表达，为融合蛋白的纯化及研制新一代乙型肝炎生物导向治疗的基因工程多肽类药物打下了基础。