卵巢上皮癌细胞SKOV3通过分泌外泌体促进单核巨噬细胞分化为肿瘤相关巨噬细胞的研究

目的:研究上皮性卵巢癌细胞SKOV3分泌的外泌体(exosomes)能否调控单核巨噬细胞分化为M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs),并进一步参与肿瘤的转移。方法:分离SKOV3细胞外泌体,透射电镜观察形态。卵巢癌细胞外泌体、M-CSF+IL-4和空培养基分别与人外周血CD14+单核细胞共培养3天,观察细胞形态。结晶紫计数单核细胞贴壁率;流式细胞仪检测共培养后单核细胞CD206、HLA-DR的表达情况;ELISA法检测共培养后上清中IL-10和IL-12的含量;体外迁移实验检测肿瘤细胞迁移能力的变化。结果:透射电镜显示,外泌体近似圆形,直径30～80nm。结晶紫计数显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的OD值(分别为0.13±0.06,0.16±0.04)较空培养基组(0.04±0.01)增加,差异有统计学意义(P<0.05)。倒置显微镜发现,细胞贴壁,形态类似巨噬细胞。流式结果显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的单核细胞CD206(分别为71.86±5.62、99.27±0.32)表达水平升高,HLA-DR(分别为12.71±7.22、3.55±0.27)表达水平降低,与空培养基组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的上清IL-10含量(分别为71.72±0.81、82.13±2.11)增加,IL-12含量(分别为34.88±4.75、19.71±4.28)减少,与空培养基组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。体外迁移实验显示,外泌体刺激单核细胞上清组的肿瘤细胞迁移数(121.58±2.25)明显增加,分别与空培养基对照组、单核细胞上清组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:卵巢上皮癌细胞SKOV3的外泌体可诱导单核巨噬细胞分化极化为卵巢癌腹膜内TAMs表型,从而促进卵巢癌细胞的迁移能力。