定点突变的人胰岛素基因在CHO细胞表达的研究

被引：2

作者：

寿思明

朱宝利

崔振中

齐顺章

机构：

[1] 中国农业大学生物学院动物生化室

[2] 北京医科大学生理系神经科学中心!河南医科大学病理教研室

来源：

中国糖尿病杂志 | 1999年 / 05期

关键词：

人胰岛素基因; 定点突变; 胰岛素基因细胞表达; Furin;

D O I：

暂无

中图分类号：

R394.3 [];

学科分类号：

0710 ; 071007 ;

摘要：

目的　研究在哺乳动物细胞中表达人胰岛素。方法　采用寡核苷酸介导的定点突变方法，改造人胰岛素基因组基因，将哺乳动物细胞内蛋白质前体加工酶Ｆｕｒｉｎ的识别和切割位点Ａｒｇ－Ｘ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－样序列，引入人胰岛素原Ｃ肽两端，在普通ＣＨＯ细胞表达了该改造后的基因。结果　首先应用突变引物Ⅰ：ＣＴＧＣＡＧＧＴＣＣＴＣＧＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＧＧＧＴＣ，引物Ⅱ：ＣＡＣＧＣＴＴＣＴＧＣＣＧＧＧＡＴＣＣＣＴＣ，按照Ｋｕｎｋｅｌ的方法，成功地进行了人胰岛素基因上两个位点的同时突变改造。利用表达载体ＰＲＣ／ＣＭＶ和突变后的胰岛素基因，构建成表达载体ＣＭＶ／ＭＩＮＳ，并在ＣＨＯ细胞中获得了表达。结论　用ＲＩＡ法检测在暂态表达的ＣＨＯ细胞培养液中人胰岛素的表达量为５．５～７０．０μＩＵ／５×１０６细胞·ｄ－１。同时，还利用Ｇ４１８进行了胰岛素表达细胞株的筛选，筛选出的ＣＨＯ细胞株的表达量为：６．５～２５．５μＩＵ／５×１０６细胞·ｄ－１。进一步需研究Ｆｕｒｉｎ酶对表达的人胰岛素的加工效果和表达产物的生物学活性

引用

页码：14 / 17+49

页数：5

共 7 条

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