姜黄素及白藜芦醇对溃疡性结肠炎小鼠巨噬细胞的影响和机制

目的 探讨姜黄素和白藜芦醇对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织巨噬细胞的影响及相关机制。方法 将60只BALB/c小鼠随机平均分为CON组、DSS组、DSS+Cur组、DSS+Res组、Eve+Cur组及Eve+Res组,每组10只。CON组为正常对照组,不进行处理,其余5组均采用3%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)制作UC小鼠模型,即自由饮用3%DSS溶液7 d。DSS组单纯建立模型,DSS+Cur组、DSS+Res组在模型基础上分别每天给予0.4 ml姜黄素、0.4 ml白藜芦醇灌胃。Eve+Cur组在模型基础上每天给予0.4 ml姜黄素灌胃后,再给予0.4 ml mTOR抑制剂Everolimus灌胃。Eve+Res组在模型基础上每天给予0.4 ml白藜芦醇灌胃后,再给予0.4 ml mTOR抑制剂Everolimus灌胃。给药7 d后处死小鼠,分离培养各组小鼠结肠组织巨噬细胞。观察小鼠一般情况并行疾病活动指数(DAI)评分。为观察姜黄素和白藜芦醇对巨噬细胞的影响,采用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活性,流式细胞术检测巨噬细胞凋亡情况,荧光定量PCR和Western blot法检测巨噬细胞中自噬相关因子LC3、Beclin-1和Atg12的mRNA和蛋白表达,ELISA法检测巨噬细胞培养上清中细胞炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。为进一步探讨机制,采用ELISA法检测mTOR抑制剂Everolimus对IL-6和TNF-α的影响,采用荧光定量PCR和Western blot法检测巨噬细胞SIRT1/mTOR信号通路相关因子mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达。结果 小鼠无死亡。与CON组相比,DSS组、DSS+Cur组和DSS+Res组巨噬细胞的增殖活性均明显增高,凋亡率均明显降低,Atg12、Beclin-1和LC3 mRNA和蛋白的表达水平明显增加(均P<0.05)；与DSS组相比,DSS+Cur组和DSS+Res组巨噬细胞的增殖活性则显著降低,凋亡率均明显增高,Atg12、Beclin-1和LC3 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(均P<0.05)。与CON组相比,DSS组、DSS+Cur组、DSS+Res组、Eve+Cur组、Eve+Res组小鼠DAI明显升高,巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,IL-6和TNF-α的表达水平明显升高(均P<0.05)；与DSS组相比,DSS+Cur组和DSS+Res组小鼠DAI明显降低,巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平明显升高,IL-6和TNF-α的表达水平明显降低(均P<0.05)；而与DSS+Cur组和DSS+Res组相比,Eve+Cur组和Eve+Res组小鼠DAI明显升高,巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低,IL-6和TNF-α的表达水平则显著升高(均P<0.05)。结论 姜黄素和白藜芦醇能够抑制UC小鼠结肠组织巨噬细胞的增殖,促进其凋亡,抑制炎症反应和自噬的发生,而上述作用可能是通过调控SIRT1/mTOR信号通路实现的。