花生胰蛋白酶抑制剂的纯化及钝化研究

目的：从花生种子中提取纯化胰蛋白酶抑制剂，研究其聚合形式及热稳定性等性质，并采用各种巯基还原剂和蛋白酶钝化其胰蛋白酶抑制活性。方法：采用５０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸溶液提取，５０％～９０％丙酮分级沉淀分离及ＥＡＥＤ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换色谱从花生（ＡｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａＬ．）种子中提取并纯化了胰蛋白酶抑制剂（ＰＴＩ）；并以ＢＡＰＮＡ为底物测定其抑制活性、热稳定性及巯基还原剂对抑制剂的钝化作用；用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法测定其分子量及蛋白酶水解敏感性。结果：ＰＴＩ是由等电点约４．３，分子量约５０００～８０００的两个多肽组成的二聚体；高度耐热、耐酸且不易被蛋白酶降解。各种巯基还原剂可不同程度地增加ＰＴＩ的热敏感性及蛋白酶水解敏感性，以二硫苏糖醇（ＤＴＩ），β－巯基乙醇（β－ＭＥ）及Ｎａ２ＳＯ３较佳。枯草杆菌蛋白酶可部分水解氧化态的ＰＴＩ，并彻底水解还原态的ＰＴＩ；而木瓜蛋白酶不能水解还原态的ＰＴＩ。结论：ＰＴＩ的热稳定性与二硫键的存在有关，还原态的ＰＴＩ增加了对热和蛋白酶水解的敏感性，巯基还原剂结合枯草杆菌蛋白酶水解可在常温下彻底钝化ＰＴＩ的活性。