改良组织块混合酶消化法成骨样细胞培养

目的 应用组织块与混合酶消化联合使用进行大鼠颅骨成骨细胞体外培养。方法 取新生2～3d的SD大鼠颅骨剪碎依次用不同浓度的胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶混合分2次对颅骨进行消化。纯化、接种后进行原代和传代培养并对细胞进行鉴定。结果 原代培养的细胞ALP染色阳性区域可以达90％以上,传代培养后细胞阳性率为100％。18d左右有钙结节形成。电镜观察示细胞表面有微绒毛,粗面内质网丰富。原代培养细胞BMP兔疫组化呈弱阳性表达,传代培养后细胞BMP表达逐渐增强,以第5代左右细胞表达强度最高。结论 改良组织块混合酶消化法成骨细胞培养具有细胞成分单一、表型稳定的特点。可为成骨细胞的代谢和生理的体外研究提供高纯度的细胞。