苜蓿愈伤组织高频再生遗传和转化体系的建立

被引:16
作者
金淑梅 [1 ]
管清杰 [1 ]
罗秋香 [1 ]
王涛 [2 ]
高野哲夫 [3 ]
柳参奎 [1 ]
机构
[1] 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心抗性分子生物学实验室
[2] 中国农业大学国家农业生物技术重点实验室
[3] 东京大学亚洲生物资源环境研究中心
关键词
苜蓿; GUS; 愈伤组织; 根癌农杆菌;
D O I
暂无
中图分类号
S541.9 [];
学科分类号
摘要
本研究以MS为基本培养基,在不同浓度的2,4-D与6-BA联合使用的诱导培养基上,以苜蓿子叶为外植体,诱导愈伤组织,诱导率为55%~90.6%,其中2mg/L2,4-D+1mg/L6-BA诱导率最高,达90.6%;浅黄色至淡绿色的愈伤组织在MS+2mg/LKT+0.15mg/L6-BA+0.3mg/LNAA分化培养基的分化率最高并且植株颜色深绿。丛生芽在1/2MS+2mg/L酵母提取物的生根培养基上再生成完整的苜蓿植株。以建立的苜蓿高频再生体系为基础,愈伤组织为转化的受体,用根癌农杆菌介导苜蓿,利用GUS组织化学染色法,研究影响遗传转化的若干因素,获得了100株转基因植株。乙酰丁香酮的浓度为100!mol/L,菌液浓度OD600为0.3~0.5,最佳的侵染时间为15min,共培养时间为4d,卡那霉素浓度为50mg/L时转化频率最合适。最高转化频率可达80%,Kana抗性植株Northernblotting检测表明,目的基因已整合进苜蓿基因组中。建立了苜蓿快速有效的遗传转化体系,为获得其它基因转化苜蓿,奠定基础。
引用
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