植物表达载体在三分三发根中的高效表达

被引：9

作者：

潘夕春 ^{[1
]}

陈敏 ^{[1
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张磊 ^{[2
]}

廖志华 ^{[1
]}

张明生 ^{[3
]}

机构：

[1] 西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室

[2] 第二军医大学药学院生药学教研室

[3] 贵州大学生命科学学院

来源：

中草药 | 2007年 / 04期

关键词：

三分三; 发根; 共转化;

D O I：

暂无

中图分类号：

R284 [中药化学];

学科分类号：

100804 [中药化学];

摘要：

目的建立基于发根培养的三分三Anisodus acutangulus遗传转化体系及在三分三发根中表达外源基因的方法。方法由种子直接萌发得到无菌苗,建立了三分三的无菌苗培养系统。将植物高效表达载体pCAMBI-A1304+导入经过“disarmed”改造的根癌农杆菌C58C1(携带pRiA4质粒),获得了携带外源基因表达载体的重组C58C1工程菌。取生长良好的幼嫩真叶作为外植体,在乙酰丁香酮的诱导下用重组C58C1进行感染,诱导发根。选取在无激素培养基上生长迅速,分支多的发根单克隆进行继代培养。经过3次继代培养,PCR(polymerase chain reaction,聚合酶链式反应)检测用于验证发根型质粒pRiA4和表达型质粒pCAMBIA1304+是否整合到三分三发根基因组内。结果建立了基于发根培养的三分三遗传转化体系,发根诱导频率达到100%,PCR检测表明pRiA4和pCAMBIA1304+质粒共转化率达到32%。结论该方法可以用于在三分三发根中高效表达外源基因,为实现基于发根的三分三产托品烷类生物碱的代谢工程奠定了基础。

引用

页码：588 / 591

页数：4

共 2 条

[1]

ELECTROPORATION OF MEGAPLASMIDS INTO AGROBACTERIUM [J].