噻唑蓝比色法检测细菌生长和存活状况的研究

建立了细菌生长和存活状况检测的噻唑蓝 (MTT)比色分析法。将S .aureus和E .coli菌以平板菌落计数法计数活菌数量 ,将一定数量细菌或经煮沸处理细菌加入微孔板 ,同时加入MTT ,于 36～ 37℃培养 ,加入DMSO溶解 ,于 51 0nm波长处测定A值 ;将一定数量活菌 ,加入不同数量MTT ,孵育不同时间 ,用不同量DMSO溶解 ,于不同波长处测定A值 ,以优化细菌MTT比色分析法条件。结果表明 :(1 )MTT能被活细菌利用 ,形成的fomazan数量与细菌浓度成线性关系 ;(2 )细菌经煮沸后MTT显色 ,A值明显降低 ,与煮沸时间成正比例 ;(3)MTT加入后在 0～ 2h内A值与作用时间成正相关 ;(4)MTT浓度增加 ,A值有一定程度增大 ;(5)以DMSO为Formazan溶解剂 ,其最大吸收波长范围为 51 0～ 530nm ;(6)以菌液体积的 2、3、4倍量加入DMSO均可较好地溶解Formazan颗粒。MTT比色分析法能反映活细菌的生长 ,存活状况 ;其较适宜的参数 :MTT终浓度0 3mg ml,作用时间 2h ,溶解剂DMSO量为菌液量 2倍 ,最大吸收波长范围为 51 0～ 530nm。