南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提，硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析，从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍，比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白，提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０，Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸，最适ｐＨ为１０．１０，７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定，最适温度为４０℃左右，对热不很稳定，以磷酸苯二钠为底物其Ｋｍ值为１．７２×１０－３ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋为该酶的激活剂，ＫＨ２ＰＯ４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ２为抑制剂。选用ＫＨ２ＰＯ４和ＤＦＰ作抑制类型的判断，结果表明，ＫＨ２ＰＯ４属竞争性掏剂，其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ；ＤＦＰ为非竞争性抑制剂，抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。