人TIMP-1 cDNA克隆、真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达

被引：7

作者：

林洪丽

陈香美

于志恒

李文歌

傅博

public.bta.net.cn

机构：

[1] 中国人民解放军总医院肾内科,中国人民解放军总医院肾内科,中国人民解放军肾病中心,中国人民解放军肾脏病重点实验室!北京,中国人民解放军肾脏病重点实验室!北京

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2000年 / 03期

关键词：

TIMP-1; 克隆; 细胞转染COS-7细胞;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2000.03.004

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

根据 Gen Bank中 TIMP- 1基因的碱基序列 ,用 RT- PCR方法从人的正常肾组织中克隆出包含信号肽在内的 TIMP- 1全长 c DNA序列 .采用 T- A克隆的方法将之插入 p CRR2 .1中间载体 ,DNA测序证实该片段序列与文献报告的完全一致 .利用亚克隆的方法将 TIMP- 1 c DNA片段克隆到 pc DNA3载体上 ,构建出 pc DNA3/ TIMP- 1的真核表达载体 ,通过脂质体 DOTAP转染至 COS-7细胞 ,Northern印迹及原位杂交证实在 COS- 7细胞上获得人 TIMP- 1的高效表达 ,细胞增殖实验表明 TIMP- 1的高产表达可促进 COS- 7细胞的增殖 ,证实了所转染人 TIMP- 1的生物活性

引用

页码：306 / 311

页数：6

共 5 条

[1]

Sambrook,J.,Fritsch,E. F.,Maniatis,T. Molecular cloning: a laboratory manual . 1989

[2]

Mammary cacinoma cells over-expressing tissue inhibitor of metalloproteinases-1 shows enhanced vescular endothelial growth factor expression. Yoshiji H,Harris S R,Raso E,Gomez D E,Lindsay C K,Shibuya M,Sinha C C,Thorgeirsson U P. International Journal of Cancer . 1998

[3]

Sequence of human tissue inhibitor of metalloproteinases and its identity to erythiod-potentiating activity. Docherty A J P,Lyons A,Smith B J,Wright E M,Stephens P E,Harris H J R. Nature . 1985

[4]

Tissue inhibitor of metalloproteinases-1 ( TIMP-1) induce differentiation and an antiapoptotic phenotype in germinal center B cells. Guedez L,Courtemanch L,Stetler-Stevenson M. Blood . 1998

[5]

Growth-promoting activity of tissue inhibitor of metalloproteinases-1 (TIMP-1) for a wide range of cells. Hayakawa T,Yamashita K,Tanzawa K,Uchijima E,Iwata K. Federation of European Biochemical Societies . 1992

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