小鼠心肌缺血/再灌注损伤中TTC染色方法的改进及蛋白酶体作用机制的探讨

目的:探讨改进的主动脉逆行灌注TTC-Evans blue双染法对小鼠心肌梗死面积的显示效果,并探讨蛋白酶体参与缺血/再灌注(I/R)的作用。方法:16只8周龄,C57BL/6J野生小鼠,随机分为假手术组(sham组)及I/R组,采用结扎冠状动脉左前降支45min,复灌2h,复制小鼠心脏I/R损伤模型。用改进主动脉逆行灌注法,分别灌注TTC和Evans blue染料,垂直于心脏长轴切片,计算梗死面积;Western-blot方法检测心肌组织中蛋白酶体各亚基表达;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡,试剂盒检测蛋白酶体活性及Caspase-3活性。结果:与sham组相比,I/R组的心肌梗死面积/危险区面积比值增加32.6%(n=8,P<0.01),心肌组织中Caspase-3活性升高2.82倍(n=8,P<0.01),而蛋白酶体糜蛋白酶样活性降低32%(n=8,P<0.01),免疫蛋白酶体亚基β1i、β2i、β5i蛋白表达分别降低49%、48%和54%(n=8,均P<0.05)。结论:改进的TTC-Evans blue双染色方法操作性强,成功率高,能够更好地为心肌I/R损伤研究提供可靠的形态学支持,心肌I/R损伤导致小鼠心肌组织蛋白酶体功能被抑制及心肌梗死面积、凋亡和Caspase-3活性增加。