毛白杨4-CL cDNA的克隆、表达及活性分析

被引：6

作者：

杨向东 ^{[1
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王汉中 ^{[1
]}

胡赞民 ^{[2
]}

刘贵华 ^{[1
]}

沈金雄 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国农业科学院油料作物研究所

[2] 中国科学院遗传与发育生物学研究所

来源：

华中农业大学学报 | 2006年 / 02期

关键词：

毛白杨; 4-香豆酰辅酶A连接酶; 原核表达; 偏爱性;

D O I：

10.13300/j.cnki.hnlkxb.2006.02.001

中图分类号：

Q943.2 [植物基因工程];

学科分类号：

摘要：

从毛白杨(Populus tomentosa)木质化茎中提取总RNA,利用RT-PCR技术进行cDNA扩增,获得1条1 621 bp的片段。测序结果表明:该片段编码536个氨基酸组成的多肽,序列中包含所有已知4-CL蛋白的2个特征序列boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。将cDNA克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,4-CL基因在大肠杆菌BL21中获得表达,所表达融合蛋白的分子量约为70 ku。酶活性分析表明:该重组蛋白对底物PA、FA、CA均表现出催化活性,其偏爱性顺序为PA>FA>CA,对SA则没有活性。

引用

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