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应用反转录-聚合酶链反应检测口蹄疫病毒
被引：10
作者：
朱彩珠
卢永干
邱孝高
赵启祖
谢庆阁
张维德
员美蓉
杨福荣
张强
机构：
[1] 中国农业科学院兰州兽医研究所
来源：
关键词：
反转录－聚合酶链反应（RT－PCR），口蹄疫病毒（FMDV），RNA萃取，动物组织，食道－咽部分泌物（O－P液）;
D O I：
10.13242/j.cnki.bingduxuebao.001118
中图分类号：
S852.65,Q78 [];
学科分类号：
090601 ;
摘要：
建立了一种适用于检测动物（猪、牛、羊）组织（肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮）和牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫（ＦＭＤ）病毒核酸（ＲＮＡ）的反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。引物对是人工合成的两条２０ｍｅｒ寡核苷酸片段，它们的序列相应于ＦＭＤ病毒结构蛋白ＶＰ１基因后２／３区段，在４个血清型之间基本一致（保守）。ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳检测。试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ具有良好的特异性，属该４个血清型的各个毒株都获得了预计长度的ＤＮＡ片段；而相关的小ＲＮＡ病毒科的猪水泡病（ＳＶＤ）和柯赛奇Ｂ５（Ｃｏｘ．Ｂ５）病毒（特异性对照），及未感染的细胞培养物和动物组织（空白对照）都是阴性。与常规检测方法相比，该ＲＴ－ＰＣＲ的检测灵敏度提高６－１２倍，最高可检测２０ＴＣＩＤ５０（细胞毒）或０．１６～０．３２ＬＤ５０（组织毒）的病毒量，二次扩增还可提高检测灵敏度１００倍。因为直接利用组织样品，检测试验快速简便，可在２４小时内获得结果。应用该方法已检测了２３２份组织样品和５８份Ｏ－Ｐ液样品，都获得了满意的结果
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